全基因合成简介

在我们的实验工作中，如果采用一般实验手段无法得到目的基因时，可以进行实验室人工合成。公司拥有成熟的基因合成技术，可根据客户要求，以具竞争力的价格和快捷的交货周期提供全基因合成服务及相关服务。合成的基因可以根据客户的需求连接到不同的载体上，最终提供的产品包括合成报告、测序报告、质粒酶切图谱、冻干质粒以及含有该质粒的菌株。 

 一、应用领域：

1. 基因突变/重组/高效表达。

2. 其他方法难获得的cDNA。

3. 合成不同的基因变异或新基因。

4. 用于微芯片的大量cDNA。

二、服务特色：

1. 免费提供基因的参考设计方案，包括设计酶切位点，密码子优化等。

2. 基因合成周期短，严格按照与用户签定的基因合成服务协议和保密合同执行。

3. 能合成长度达 10 kb 的基因。

4. 基因克隆到用户指定或提供的表达载体上。

三、服务流程： 

1. 收到客户提供序列后，确定使用何种酶切位点克隆，克隆到何种载体等等，然后对全系列进行编辑，传至客户确认。

2. 经分析确认达成一致意见后，签订基因合成服务协议与保密合同。基因合成服务协议签定后，客户需预付50% 的合成费用，本公司方开始合成。交货期也从即日开始。

3. 设计Oligo合成方案，在全自动合成仪器上进行单链的化学合成。

4. 通过OVER-LAP的PCR，把单链Oligo拼接成双链的全长基因。

5. 将PCR产物酶切、纯化，连接到质粒中，将质粒转入细胞株培养。

6. 提取阳性克隆进行DNA测序，确认插入片段的准确性。

7. 对可能存在的错误位点用定点突变的方法加以改正，再经测序验证。

8. 提供实验报告，包括装载目的基因的质粒、细菌株、测序图谱 / 序列。

9. 合成完毕后，本公司通知客户，收到全部货款，本公司开始发货 。

四、情况说明 

1. 由于基因结构的复杂性，对于较长的片段或一些复杂结构如重复序列、高 GC 片段等，可能会需要额外的时间调整合成方案。如果发生这种情况，技术人员会及时与您联系，告知您合成进程。

2. 所合成的基因一般克隆于通用载体中，如需克隆在客户指定的载体中，我公司会酌情再收取一定的费用，并且交货时间会适当延长。

五、密码子优化：

　　对于密码子优化服务，在提供需要优化和合成的基因序列的同时，我们还需要如下讯息：

1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列。

2. 宿主表达系统。

3. 两端的限制性酶切位点。

4. 优化后的序列中需要避免的限制性酶切位点。

5. 优化后的序列中需要保留的限制性酶切位点。

六、合成完成后向客户提供的技术资料与产品 

1. 不少于2ug的含目的基因的通用载体质粒一份。

2. 含上述质粒的大肠杆菌菌株一份。

3. 基因序列的原始报告测序正本一份。

4. 基因合成报告一份。

七、全基因合成服务要求 

1.  请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知公司的业务员或公司的技术员。

2. 请说明实验的具体要求，如：使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。

3. 测序结果如果发现有错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对。

4. 提供实验结果：包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。

定点突变

通过实验方法可以向目的基因片段中引入所需的 DNA 变异，包括碱基添加、删除、点突变等。

（一）服务要求

1. 请您通过业务员或技术员提供需要进行突变基因的详细序列；突变前序列请标注为：Wild sequence；突变后序列请标注为：Mut sequence。
2. 请提供突变基因克隆操作的详细背景资料，例如使用何种限制酶酶切位点、克隆于何种载体等。
3. 请说明实验的具体要求，详细情况请参考如下：

客户常问的几个问题：

1.如果想在贵公司做与基因工程相关的技术服务，该如何联系?

可以直接通过业务员或公司的技术部联系；同时提供详细的背景资料、实验要求等。技术人员经过研讨后将与您联系，共同制定实验方案，并告知您具体的服务价格和完成时间；我们将在收到您同意实验的文字资料与实验材料后立即开始实验。

2.贵公司对我们提供的实验材料有何具体要求?

（1） 对实验材料中涉及病原体等危险的材料拒绝接受。
（2） 在实验材料中涉及到的碱基序列须以电子版的形式提供. 
（3）实验中使用的载体等要尽量提供详细的背景资料（如质粒大小、抗性、拷贝数、多克隆位点等 ） ；如 果为商品化载体，请提供生产厂家及标准名称；如果所提供载体是您自己构建的，请注明大体结构情况。
（4）实验中如果使用氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、卡那霉素以外的抗生素时，抗生素需您自己提供。
（5）您自己提供的引物如果为干品，请标明具体的 OD 数；如果为液体状态，请标明具体浓度。

3.公司能免费提供哪些载体和引物?

公司免费提供测序及 PCR 扩增用的通用引物： Bca BEST Primer M13(-47) 、 Bca BEST Primer RV-M 、 T3 Promoter 、 T7 Promoter 、 AOX 3" 、 AOX 5" 、 pGEX 3" 、 pGEX 5" 以及 SP6 Promoter 等。

4. 基因工程操作服务通常耗时较长，如果想了解实验进展情况该怎么办?

公司在每周五以 E-mail 的形式将实验进展的大体情况通知客户；您也可以向业务员查询；也可以直接与技术人员交流沟通。

（二）操作程序

1. 具体联系方式请参考“ 客户常问的几个问题 ”。
2. 如您提供的模板序列为非公司的测序结果，我们将首先对模板进行测序并将与您沟通测序结果。
3. 根据突变方案设计合成突变引物，进行基因突变实验的 PCR 反应，克隆变异体。
4. 进行 DNA 测序验证突变序列的正确性。
5. 提供实验结果，包括实验操作规程、突变用引物、质粒变异体以及含有该质粒的菌种（穿刺菌）、测序结果、测序彩色峰图等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通载体上的单点突变的时间约需 10 天左右。

（三）收费标准